1、将无菌操作台灭菌30min，并用75%酒精棉球消毒包括手在内的所有物品。
2、用灭菌接种环扣取试管中的冷冻菌块，然后放入3mlLB液体培养基上，最后在37℃150rpm过夜培养。
3、将过夜菌液重新按照上一个步骤活化一次，一般经2次活化的菌液即可用于实验。这个过程操作一定要快，应提前准备好所有的物品后，再去冰箱取出保种菌。
一、甘油菌种怎么复苏
1、对无菌操作台灭菌30min，然后用75%酒精棉球消毒包括手在内的所有物品。
2、使用灭菌接种环扣取试管中的冷冻菌块放入3mlLB液体培养基上，操作应适当快一些，以减少冻存管内的融化，然后在37℃150rpm过夜培养。
3、将过夜菌液重新按照步骤2活化一次，经过2次活化的菌液即可用于实验。这个过程应准备好所有的东西后，再去冰箱取出保种菌，时间太久会导致保种菌死亡。
二、甘油菌种保藏具体步骤
甘油菌种保藏大多采用-80℃（-70℃）冰箱保藏，具体操作步骤如下：
1、甘油原液太粘稠，应配制合适的甘油水溶液，在无菌操作条件下，分别向已灭菌的2mL冻存管中，加入500uL菌液和500uL50%甘油溶液，充分混匀后，分装至提前灭菌好的保藏管中。
2、将甘油菌放入-80℃（-70℃）冰箱保藏，注意“慢冻快化”，冷冻时降温速率保持1℃/min，保藏时间一般为2-4年左右。有时为了减少菌体因冰晶形成造成的死亡，也会使用液氮速冻之后在放到-80℃冰箱保存。
